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注意事項
注意事項
流式細胞分選儀使用注意事項
一 檢體製備注意事項:
經螢光抗體標定或表現螢光蛋白的細胞皆可進行分選，但上機前必須完...
一 檢體製備注意事項:
經螢光抗體標定或表現螢光蛋白的細胞皆可進行分選，但上機前必須完成下列程序：
1. 上機前，樣品必須先過濾去除黏聚的細胞團塊或組織塊，譬如以Cell Strainer (BD #352340，with 40 µm nylon
mesh) 進行過濾，或使用具有過濾上蓋之無菌管 (BD # 352235)。若用未過濾的樣品上機而造成機器堵塞及損
壞，使用者需負賠償之責任。細胞團塊與死亡釋出之DNA未適當濾除，亦容易增加液體黏稠度而造成液流與液
滴形成的不穩定度，進而嚴重影響分選的精準度。
表1. 各種細胞的建議上機濃度如下表:
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Cell type
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Concentration
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Lymphocytes, thymocytes or splenocytes (直徑8-12μm)
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2 × 107 /mL
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Activated lymphocytes, small cell lines (直徑12-20μm)
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1-2 × 107 /mL
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Large adherent cell line (直徑>20μm)
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1 × 107 /mL
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** 依此類推, 若只有２× 10６ 顆細胞，則僅需懸浮於 200uL sorting buffer (配方請參考Q&A)中，
維持建議濃度即可。反之，若有更多的細胞，譬如４ × 107 顆細胞，則請懸浮於２-4mL sorting
buffer中。 因為過濃的細胞濃度, 很容易讓細胞再形成凝聚團塊，阻塞管路。濃度過稀則會增加上
機時間，浪費寶貴時間。準備分選儀的上樣樣品時，樣品體積不低於100uL即可。
**另請注意: 上樣細胞需懸浮於過濾後的sorting buffer (配方請參考Q&A) 中, 以免雜質干擾到細胞的
辨識與分選的精準度，特別是對未經螢光標定或選擇以 negative selection來分選的細胞樣品影響更大。
同時，細胞濃度越稀疏，受懸浮液中雜質干擾的機會越大，也越容易收到非目標細胞的物體。
2. 若細胞分選後需再進行培養，請準備含合適medium之收集管，於分選前交給操作員。使用15mL離心管收集細
胞者，請先於管中加入7-8mL的medium、使用5 mL離心管收集細胞者，請先於管中加入2 -3mL的medium做
為細胞分選時的墊底液 (cushion)，減少細胞掉落時直接撞擊管壁所造成的衝擊與傷害。
3. 若欲分選表現GFP，RFP或DsRed等螢光蛋白之細胞，需提供未表現該螢光蛋白之相同細胞做為控制組樣品，以
進行分選前之儀器校正。
4. 若欲以多重螢光染色進行分選，需提供各種單一螢光染色之樣品做為分選前調整校正之用。
5. 由於分選出來的細胞多半還是要帶回實驗室繼續培養或進行後續實驗，因此可在分選前的細胞樣品懸浮液中加入
微量死/活細胞染劑 (譬如PI, 7-AAD或DAPI)，以確保分選時可針對 "活" 細胞進行收集，減少無效死細胞的收
集。至於收集後的細胞存活率則與細胞本身的耐受強韌度有關了，也可再做染色確認。
6. 本服務項目以無菌分選為主，委託服務者需提供無菌狀態之樣品。
7. 請大家盡力排除各種降低分選效率的非儀器端因素，儀器端的部分則由我們技術員進行確保，大家一同努力獲得
更理想的分選結果。
二、取消預約：
1. 至遲請於預約時段前一天(12:00)取消預約，否則需收取750元。
2. 一個月內取消預約次數不得超過2次，第3次開始需收取750元。
其他注意事項請參考 Q & A
流式細胞分析儀使用注意事項
檢體製備注意事項:
1.理想樣品濃度 : ~106cell/ml。細胞濃度過高，易造成管路阻塞...
檢體製備注意事項:
1.理想樣品濃度 : ~106 cell/ml。細胞濃度過高，易造成管路阻塞；過稀則增加上機時間，浪費寶貴時間。
準備分析儀的上樣樣品時，樣品體積建議最少為300uL，用來調整參數的未染色或單染樣品，體積可多些
(500~1000uL) ，以免樣品不足而無法完成參數設定。
2.樣品必須先過濾去除黏聚的細胞團塊或組織塊，譬如以Cell Strainer (BD #352340，with 40 µm nylon mesh)
進行過濾，或使用具有過濾上蓋之無菌管 (BD # 352235)。若用未過濾的樣品上機而造成機器堵塞及損壞，使用
者需負賠償之責任。
取消預約的相關規定
(1) 經管理人員同意與確認後，方能取消預約。
(2) 擬取消預約者，最後的取消時間為預約使用日當日上午8：30。
(3) 規定時間前未完成取消動作者視同使用該時段。
(4) 若因非抗力因素造成無法使用者，由管理人員酌情處置。
其他注意事項請參考 Q & A
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